影响考马斯亮蓝法测定蛋白质的因素有哪些

在酸性条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，导致最大吸收峰由465 nm 变为595 nm，同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合，测量在595 nm处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/mL，最小可测2.5μg/mL蛋白质，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程：
该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1．Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至1000ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2．标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。
3．将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。
4．按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
5．每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．
6．根据标准曲线计算待测样本的浓度。
注意：
考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德华力结合，反应快速，并且稳定，无法用普通试剂洗掉。待一两周左右，皮屑细胞自然衰老脱落即可无碍。考马斯亮蓝显色法的基本原理是根据蛋白质可与考马斯亮蓝G-250 定量结合。当考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合后，其对可见光的最大吸收峰从 465nm 变为 595nm。在考马斯亮蓝 G-250 过量且浓度恒定的情况下，当溶液中的蛋白质浓度不同时，就会有不同量的考马斯亮蓝 G-250 从吸收峰为 465nm 的形式转变成吸收峰为 595nm 的形式，而且这种转变有一定的数量关系。一般情况，当溶液中的蛋白质浓度增加时，显色液在 595nm 处的吸光度基本能保持线性增加，因此可以用考马斯亮蓝 G-250 显色法来测定溶液中蛋白质的含量。长期以来，人们一直习惯用 Lowry 法来测定蛋白质浓度， 但近些年来， 越来越多的人开始用考马斯亮蓝 G-250显色法来测定蛋白质浓度，与 Lowry 法相比，该方法具有下列优点：①方法简单，只需一种显色液。②反应迅速，只需一步反应，显色可在 5 min 之内完成。③干扰少，许多被认为对 Lorwy 法有干扰的物质（如糖、缓冲液、还原剂和络合剂）不影响该方法。尽管该方法有如此多的优点，但在实际应用中也有其缺点，如线性关系不很好，因此使用该方法测定蛋白质浓度时应特别注意。

武汉理工大学gpa有哪几项

武汉理工大学的GPA计算方法如下：
平均学分绩点（即GPA）=(课程学分1*绩点+课程学分2*绩点+......+课程学分n*绩点)/(课程学分1+课程学分2+......+课程学分n)，其中课程学分视不同课程而定，比如高等数学理工大的学分是5.5个学分，具体可参照专业的培养计划或课表，绩点的话，60分对应的绩点是1.0，61对应的绩点是1.1，......70分对应的绩点是2.0，以此类推。
GPA的计算一般是将每门课程的绩点乘以学分，加起来以后除以总的学分，得出平均分。中国中小学一般没有GPA，但是各高等院校从1999年起开始采用GPA衡量在校学生成绩，教育部并作出相关规定。
中国高校的分数设置最常见的为五分制或四分制，具体的折合方式视各个学校规定而有所不同。对于四分制，百分制中的90分及以上可视为绩点中的4分，80分以上为3分，70分以上为2分，60分以上为1分;五分制中的5分为四分制中的4分，4分为3分，3分为2分，2分为1分。
高校的GPA一般在最终成绩单，尤其是中英文成绩单上出现。在学校官方的记录系统里面也可以查到该生的GPA。

扩展资料：
虽然GPA一般不作为国内入学标准，但是在奖学金评选和保送生资格评选时都会占到比较重要的地位。最终GPA低于60%-50%很可能会影响到顺利毕业或取得学位。
GPA的算法非常复杂，根据论文或研究项目、专业必修课、专业选修课、公共必修课和公共选修课等不同类型课程的绩点与学分之积的总和再除以总学分得出。每个学校的相关规定都有区别，一般都不会是所有成绩简单相加再除以科目数量。
所以建议在计算GPA的时候，一定要先准确参考学校的相关规定。美国多数大学对申请人的GPA都有最低规定，不够最低要求的不予考虑。一般美国大学对于奖学金申请者的GPA要求是3.0以上。
参考资料来源：百度百科—GPA

武汉理工大学GPA怎么算

我也是理工大要出国的，我前几天才去学校办手续，我最专业啦哈哈，GPA全算，但是公共选修成绩差的话可以不算，还有不及格的，但是补考过的，就算补考过是多少分就是多少分（不是60哦）。其他的都要算一科不能少。还有我们教务处网上面的平均学分绩点是是5分制的，而国外，特别是美国是4分的，你自己要重新算，网上有个GPA计算器，我都是在那里自己算的，学校不帮算（其实这样还好），非常方便~！！
你可以加我QQ，我帐户上面那个就是我的号码。。
最后，，看我帮你打那么长，又那么专业，你还是给我分吧，不要让我等太久哦哈哈

武汉理工大学毕业生如何查询成绩？

从学校网站进入教务处网站 然后用学号以及密码登陆 登陆不进去 可以打电话到本学院的院办 让其给你电子成绩单 至于具体怎么办 还是得打电话咨询

教育心理学名词解释 普克马雷原理 急

教育心理学研究教育和教学过程中的种种心理现象及其变化，揭示在教育、教学影响下,受教育者学习和掌握知识、技能、发展智力和个性的心理规律；研究形成道德品质的心理特点，以及教育和心理发展的相互关系等。