A-498（人肾癌细胞）细胞由Aaronson·S建立，是从一名52岁女性肾癌患者的肾组织中分离出的具有上皮形态的细胞系。该细胞系是一种合适的转染宿主，在肿瘤研究中具有一定的应用价值，常作为肾细胞癌研究的模型。

本期细胞学堂为大家整理了A-498细胞的培养条件与传代、冻存步骤及常见应用，帮助您快速上手开展实验。

细胞形态

A498细胞贴壁生长，呈上皮样形态，细胞铺开面积大，单位面积细胞总数量少，少量细胞有触角；

低密度时可观察到单个细胞清晰的边缘，密度大于100%时边缘不清晰，细胞与细胞之间没有间隙；

A-498细胞显微镜图

培养方法

培养条件

MEM＋10% FBS＋1% P/S；

气相：空气，95%；二氧化碳：5%；

温度：37℃；培养箱湿度：70%-80%；

生长特性

贴壁生长，上皮细胞样；

倍增时间

33-36h；

冻存条件

冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

温度：液氮

A-498细胞的传代

01、细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养；

02、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；

03、加1mL胰酶（含0.25% EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化2-3min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆、分离并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化；

04、按3-4mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4min，弃去上清液，补加2-3mL培养液后吹匀；

05、收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的已添加好新鲜培养基的皿中或者瓶中，传代后每个T25培养液总体积是5-6mL，后续传代根据实际情况按1:2到1:4的比例进行。

 注意事项 

A-498细胞铺开面积大，单位面积细胞总数量少，需要合理控制传代密度，建议细胞密度80%时，1:2-1:4传代，2-3天换液或传代一次；

A-498细胞的冻存

有血清程序冻存（需梯度降温）：

01、配置冻存液，冻存液推荐配比：55%（基础培养基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；

02、制备好的细胞悬液计数，计算总细胞量；

03、细胞离心后尽量吸干净上清，离心转速1200rpm（250g）3min；

04、加入配置好的冻存液重悬，调整细胞浓度为3×106~1×107cells/mL；

05、分装入冻存管，一个冻存管分装1~1.5mL；

06、推荐使用程序降温盒，分装好的冻存管转入程序降温盒后直接放入-80℃冰箱过夜；

07、从-80℃冰箱取出冻存管迅速转移到液氮长期保存。

常见应用

 A498细胞常作为肾细胞癌研究的模型：

① 通过转染调节特定信号通路，研究其对细胞增殖、侵袭的影响；

② 研究药物对肾癌细胞进展的抑制作用，筛选肿瘤药物；

③ 通过A498在动物体内造模，模拟肾细胞癌细胞在体内行为，研究肾细胞癌生物学特性等。

●参考文献●

[1]张悦,于学炜等.黄芪甲苷调节 miR－21 基因抑制肾癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的机制探讨[J].现代肿瘤医学,2020,28(18):3145-3149

[2]Yan Sun,Liang Zhu,et al.ZDHHC2-Mediated AGK Palmitoylation Activates AKT–mTOR Signaling to Reduce Sunitinib Sensitivity in Renal Cell Carcinoma. Cancer Res (2023) 83 (12): 2034–2051.https://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-22-3105