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重组蛋白质纯化

6xHis标签记蛋白的高得率、高纯度、中等规模纯化。采用200 mL含有HisPur Ni-NTA Superflow琼脂糖或Qiagen™ Ni-NTA Superflow 的层析柱在3小时内纯化超过4 g过量表达的6xHis-GFP。以20 mL/min的速率,上样1 Ll裂解液,再然后采用含有30 mM 咪唑异吡唑的洗涤缓冲液洗涤至基线澄清。然后采用含有300 mM 咪唑异吡唑的洗涤缓冲液洗脱结合的蛋白质。富集含有纯化的6xHis-GFP 的组分,采用Pierce 660 nm 蛋白定量(货号22662)法进行定量。通过分离SDS-PAGE 上样、流穿通、洗涤和洗脱的组分用SDS-PAGE分离,采用Imperial 蛋白染色剂(货号24615)染色,然后采用myImage分析软件(货号62237)测定纯度。

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