【产品名称】
通用名称：结核分枝杆菌核酸检测试剂盒(荧光PCR法)
【包装规格】
100人份/盒
【预期用途】
本试剂盒适用于检测痰液样本中的结核分枝杆菌（TB）DNA，可用于结核感染的定性检测，检测结果可用于结核分枝杆菌感染的辅助诊断。
【检验原理】
本试剂盒采用聚合酶链式反应（PCR）结合Taqman技术，对结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）的特异性DNA核酸片段进行荧光PCR检测。
【主要成分】
组分成分
100人份/盒
主要成分
规格
数量
PCR反应液
1887μL /管
1管
引物、探针、脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）、缓冲体系
酶混合液
52μL /管
1管
Taq酶、UDG酶
阳性对照
200μL /管
1管
含目的片段的质粒
阴性对照
500μL /管
1管
生理盐水
内部质控品
105μL /管
1管
质粒
【储存条件及有效期】
试剂置于-30~-15℃避光保存，有效期为12个月。本产品反复冻融应不超过5次。
【适用仪器】
荧光定量PCR仪：ABI 7500荧光PCR仪.；ABI Quantstudio5 ；Gentier 96R；SLAN-96P全自动医用PCR分析系统。
【样本要求】
1.适用样本类型：痰液
2.样本采集
以清晨第一口痰为宜，先用清水漱口，嘱咐患者用力咳出深部的痰于无菌保存管，密封，即可送检。
3.样本保存与运送：
上述采集的样本可立即用于检测，或2-8℃保存（不超过24小时），长期保存请置于-20℃。标本运送用冰壶加冰或泡沫箱加冰密封进行运输。
【检验方法】
1. 样本处理
取待测样本200ul，按照核酸提取试剂盒说明书进行核酸提取。
2. 试剂配置（在准备区进行，与扩增区分开，冰上操作）
注：试剂使用前要完全解冻，使用前涡旋混匀，10000 rpm离心5 s，确保试剂完全离心至管底，否则会出现装量差异的现象。若有N个待检测样本，则需配置N+2扩增反应（待检样本数N+1个阳性质控品+1个阴性质控品），按下表要求进行扩增反应液的配制，配制完成后充分震荡混匀，10000 rpm离心5 s。按每管20 μl分装至0.2 ml PCR管中，并做好标记，扩增反应液需现配现用。
N人份(μL)
PCR反应液
（N+2）×18.5
内部质控品
（N+2）×1
酶混合液
（N+2）×0.5
总量
（N+2）×20
3. 加样（在样品处理区进行，冰上操作）
按阴性质控品、待测样品、阳性质控品的加样顺序，分别取5μL，加入至已分装扩增反应液的八联管中，反应总体系为25μL。盖紧管盖，短暂离心后置于荧光定量PCR仪中，并记录样本摆放顺序。
4. 扩增反应（在扩增区进行）
选择FAM通道检测结核分枝杆菌核酸，选择CY5通道检测内标。按以下扩增程序表设置PCR扩增参数。
步骤
温度
时间
循环数
1
预变性
95℃
3min
1
3
变性
95℃
10sec
45cycle
4
退火延伸及荧光检测
60℃
30 sec
报告荧光：FAM、CY5；淬灭荧光：NONE。
5.质量控制
FAM通道Ct值
CY5通道Ct值（内部质控品）
阴性对照
UNDET
≤35
阳性对照
≤35
—
以上要求需在同一次实验中同时满足，否则，本次实验无效，需重新进行。
6.结果判读
反应结束自动保存结果，根据分析后图像调节Baseline 的Start 值、End 值以及Threshold 值（可以根据实际情况自行调整，Start 值可以在3~15、End 值可设在5~20，调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线），点击Analysis 自动获得分析结果，在Report 界面观看结果。
试验结果判断
FAM通道
CY5通道
结果判定
1
Ct值>40
Ct值40
Ct值>35
复检：重新取样检测
【检验结果的解释】
1．实验室环境污染，试剂污染，样品交叉污染会出现假阳性结果，如阴性对照检测为阳性，则需做进一步实验来确认是哪类污染。如为试剂污染，需开封新的试剂盒再次进行实验；如为样品交叉污染，应重复实验；如为实验室环境污染，需对实验室进行彻底清洁或更换实验室再进行实验。
2．试剂运输、保存或配制不当会引起试剂检测性能下降，出现假阴性结果。如阳性对照检测为阴性，应开封新的试剂盒再进行实验。
【检测方法的局限性】
1. 该试剂盒仅为定性产品，不做定量测定。
2. 该试剂盒的检测结果仅供临床参考，对患者的临床诊治应结合其症状或体征、病史、其它实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。
3. 当样本的细菌含量低于最低检出限时，可能会出现假阴性。阴性结果仅说明提取的核酸浓度低于该试剂盒的检测极限，但不能完全排除细菌感染的可能。
【产品性能指标】
1.准确性：企业阳性参考品检测结果全部为阳性，阳性率为15/15。
2.最低检测限：该试剂盒最低检测限为500copies/mL。
【注意事项】
1．请严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰上操作。
2．试剂配制建议在试剂配制区进行，样品处理要求在生物安全柜内操作。临床实验室应严格按照《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》等有关分子生物学实验室、临床基因扩增实验室的管理规范执行。
3．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。反复冻融可能降低试剂盒灵敏度，请按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
4．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，切忌开盖。
5．不同批号试剂请勿混合使用，请在有效期内使用试剂盒。
6. 本品仅用于体外诊断。