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微生物学

出发菌株含诱变剂的液体培养基接种培养培养接种分离紫外线选择优良突变株③诱变剂及处理的剂量和方法诱变剂的选择紫外线,硫酸二乙酯、NTG、NMV。合适剂量的确定剂量以诱变剂浓度和处理时间来表示;实际工作中常用杀菌率作为相对剂量。合适剂量:能扩大变异幅度又能促使变异移向正变范围的剂量。诱变处理的方法复合处理的协同效应两种或多种诱变剂先后使用;两种或多种诱变剂同时使用;同种诱变剂重复使用。④变异菌株的分离和筛选菌悬液的后培养:突变必须复制才能表现出来;提高突变率。寻找和利用形态、生理和产量间的相关性。变色圈试验相关培养基基本培养基[-]完全培养基补充培养基三类遗传型野生型[A+B+]营养缺陷型型[A+B-]原养型[A+B+]设计或采用高效筛选方案或方法一个出发菌株诱变剂处理选出200个单孢子菌株初筛(每株1瓶)选出50株复筛(每株4瓶)选出5株第一轮第二轮五个出发菌株初筛(每株1瓶)选出50株复筛(每株4瓶)选出5株40株40株40株40株40株诱变剂处理突变春日霉素产生菌的孢子悬液·琼脂块培养法筛选春日霉素高产菌种含供试菌种(拮抗对象)的琼脂平板高产突变株的筛选培养基(含青霉素)接入敏感菌液(含抗性突变株)涂布抗青霉素菌落培养抗性突变体的筛选青霉素浓缩法强抗性中抗性弱抗性含异烟肼接敏感菌含突变株抗性突变体的筛选梯度培养皿法小菌落是第二次长起来的(营养缺陷型)营养缺陷型的筛选办法诱变处理;淘汰野生型;检出营养缺陷型;鉴定营养缺陷型。夹层培养法涂布培养基本培养基上不长菌落完全培养基上长出菌落含诱变剂液体培养基菌种营养缺陷型逐个检出法微生物的遗传变异和育种遗传性(heredity):亲代生物(parent)通过传递给子代(offspring)的一套遗传信息而保持其相同形状的特性,遗传是相对稳定的。变异性(variation):在遗传物质水平上发生改变,而引起相应性状发生改变的特性,变异是可以遗传的。基因型(遗传型、因子型):决定生物遗传性的物质基础特征,即全部遗传因子特征。表型(表现型、现象型):在合适的外界环境条件下,特定遗传性的个体,通过新陈代谢和生长发育所表现出的种种具体性状。表型改变不涉及遗传物质结构或复制过程的改变,常发生在转录水平或翻译水平上,故遗传型相同的个体在不同环境条件下,常表现出不同的形状。遗传变异规律研究意义①促进分子生物学基本理论问题研究;②为邻近学科发展提供方法论;③为育种工作提供理论基础。微生物是遗传学研究的最好材料和对象①微生物结构简单;②营养体一般都是单倍;③微生物繁殖速度快;④易积累不同的中间及最终代谢产物;⑤环境条件对微生物作用直接均匀;⑥存在多种方式的繁殖类型;⑦微生物的变异易被识别;⑧参与基因工程的载体、供体、受体三角色。内容提要遗传变异的物质基础基因突变和诱变育种基因重组和杂交育种一、遗传变异的物质基础1.三个经典实验证明核酸是微生物遗传物质(1)转化实验:1928年,Griffith发现肺炎双球菌间的转化现象。1944年Avery证明转化本质是DNA。试验材料:肺炎双球菌光滑型(S)粗糙型(R)荚膜菌落光滑分泌毒素致病SISⅡSⅢ三个血清型无荚膜菌落粗糙无毒不致病RⅠRⅡRⅢ三个血清型活的S菌加活R菌和热死S菌抽血分离死加活S菌死加活R菌或死S菌活动物实验SⅢ〖杀死〗无菌落生长体外培养RⅡ〖活菌〗体外培养RⅡ菌落RⅡ菌落多SⅢ菌落少体外混合培养SⅢ〖杀死〗RⅡ〖活菌〗细菌培养试验大量R菌落活R菌S菌无细胞抽提液+活R菌+S菌DNAS菌落S型菌无细胞抽提液试验S菌PrS菌多糖R菌落活R菌+DNA只含P不含S,Pr只含S不含P;用含同位素S35,P32的培养基培养大肠杆菌;让T2感染上述大肠杆菌使其打上S35、P32标记。原理吸附10分钟后搅动离心上清液沉淀结果:上清液中含15%放射射性;沉淀中含85%放射性(2)噬菌体的感染试验1952年,Hershey和Chase用放射性同位素标记噬菌体的核酸和蛋白质,

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